AbMole科研-UBE2B通过促进RAD18介导的ZMYM2单泛素化和稳定促进卵巢癌生长

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是: UBE2B通过促进RAD18介导的ZMYM2单泛素化和稳定促进卵巢癌生长。

泛素结合酶E2B (UBE2B)可与泛素E3连接酶RAD18形成异二聚体。在本研究中，我们旨在探索UBE2B/RAD18复合物的新底物及其在卵巢癌中的调节作用。使用GeneMANIA预测蛋白质的物理相互作用。使用商业卵巢癌组织阵列的连续切片检查UBE2B、RAD18和ZMYM2的蛋白表达。免疫荧光染色和共免疫沉淀试验检查它们的位置和相互作用。采用环己酰亚胺chase法研究UBE2B和RAD18对ZMYM2降解的影响。构建移植瘤模型，评估UBE2B-ZMYM2轴对体内肿瘤生长的影响。23例卵巢癌中UBE2B与ZMYM2呈强正相关，RAD18与ZMYM2呈中度正相关。在CAOV4和OVCAR3细胞中，myc-ZMYM2与UBE2B和RAD18相互作用。抗RAD18免疫沉淀的样品中检出UBE2B和ZMYM2。UBE2B过表达或敲除均不影响ZMYM2 mRNA的表达。UBE2B过表达增加了ZMYM2的单泛素化，但减少了其多泛素化。RAD18敲除抑制ube2b诱导的ZMYM2单泛素化。UBE2B过表达显著增强了ZMYM2蛋白的稳定性，而RAD18敲低则削弱了ZMYM2蛋白的稳定性。UBE2B过表达显著促进了CAOV4细胞衍生的异种肿瘤的生长。ZMYM2的下调再次显著抑制了肿瘤的生长，并削弱了UBE2B过表达的促生长作用。总之，本研究揭示了UBE2B/RAD18复合体对卵巢癌中ZMYM2单泛素化和稳定性的新调控作用。

MG132（Abmole，M1902，纯度>98%）是一种蛋白酶体抑制剂，IC50为100 nM，也抑制钙蛋白酶，IC50为1.2 μM。MG132可以抑制NLRP1的活化。Cycloheximide (NSC-185)（Abmole，M4879，纯度>98%）是一种蛋白生物合成 (protein synthesis) 的抑制剂, IC50值为532.5 nM。Cycloheximide也是一种抗真菌 (antifungal) 素，Cycloheximide 还可抑制铁死亡 (ferroptosis) 并抑制自噬 (autophagy)。

Figure 4. UBE2B promotes RAD18 mediated ZMYM2 monoubiquitination and stabilization.

由于UBE2B是一种泛素结合酶，而RAD18是一种E3泛素蛋白连接酶，我们随后检测这些蛋白是否能够调节ZMYM2蛋白的稳定性。CAOV4和细胞中UBE2B过表达或OVCAR3细胞中UBE2B敲低均未改变ZMYM2 mRNA表达(图4a,b)。然而，过表达UBE2B增加了ZMYM2蛋白水平(图4c)，而敲低UBE2B则降低了ZMYM2蛋白水平(图4d)。MG132处理消除了UBE2B敲除引起的ZMYM2下调(图4d)。RAD18敲除降低ZMYM2蛋白水平，取消UBE2B过表达增加ZMYM2增量(图4e)。RAD18过表达也增加了ZMYM2蛋白的水平，但当UBE2B被敲除时，这种作用受到了阻碍(图4f)。MG132治疗消除了这些改变(图4g,h)。这些结果表明，UBE2B可能是ZMYM2蛋白水平的正向调节因子，可能通过泛素-蛋白酶体途径。为了验证这一假设，我们进行了共IP试验来检测ZMYM2的泛素化。

结果表明，RAD18敲低增加了ZMYM2的多泛素化，但减少了其单泛素化(图4i)。UBE2B过表达增加了ZMYM2的单泛素化，但减少了其多泛素化(图4i)。RAD18敲低降低了UBE2B过表达诱导的ZMYM2单泛素化增量(图4i)。这些发现表明UBE2B和RAD18都是ZMYM2单肽化的正向调节因子。然后，我们进行CHX追击试验，以检测ZMYM2蛋白的稳定性。RAD18的敲低显著缩短了ZMYM2蛋白的半衰期(图4j,k)。UBE2B过表达显著增强了ZMYM2蛋白的稳定性(图4j-l)。RAD18敲除减弱了UBE2B过表达对延长ZMYM2蛋白半衰期的作用(图4j-l)。总的来说，这些发现表明UBE2B和RAD18通过增加ZMYM2的单泛素化作用，共同提高了ZMYM2的稳定性。

鸣谢：Xi Zeng, et al. Bioengineered. 2022 Apr;13(4):8000-8012.