AbMole科研-胆固醇通过诱导EGFR/Src/Erk/SP1信号通路介导的ERRα重表达促进NSCLC中的EGFR-TKIs抗性

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是: 胆固醇通过诱导EGFR/Src/Erk/SP1信号通路介导的ERRα重表达，促进NSCLC中的EGFR-TKIs抗性。

背景:表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的使用为EGFR突变的晚期NSCLC患者的生存带来了显著的好处。然而，获得性耐药是不可避免的，这限制了EGFR - TKIs在临床的应用。本研究报道了一种维持耐药的常见分子机制和克服EGFR - TKIs耐药的潜在治疗方案。

方法:建立耐EGFR - TKIs NSCLC细胞，采用MTT法进行检测。在体内检测胆固醇含量，测定胆固醇对NSCLC生长的促进作用。然后，确定ERRα的表达是胆固醇介导耐药的下游因素。为了分析其调控机制，进行了免疫荧光、共免疫沉淀、荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀实验。

结果:长期暴露于EGFR - TKIs可产生以胆固醇在脂筏内积聚为特征的耐药，促进EGFR和Src相互作用，导致EGFR/Src/Erk信号活化介导的SP1核易位和ERRα重表达。进一步的研究发现ERRα是SP1的靶基因。功能上，ERRα的重新表达通过调节ROS解毒过程来维持细胞增殖。洛伐他汀(一种用于降低胆固醇水平的药物)和XCT790(一种ERRα的逆激动剂)在体外和体内都克服了吉非替尼和奥西替尼的耐药性。

结论:研究表明，胆固醇/EGFR/Src/Erk/SP1轴诱导的ERRα重表达促进吉非替尼和奥西替尼耐药癌细胞的存活。此外，还证明了降低胆固醇和下调ERRα作为NSCLC有效辅助治疗的潜力。

Rapamycin (Abmole，M1768，纯度>99%)(h) 是一种选择性的mTOR抑制剂，IC50为~0.1 nM. Y-27632 dihydrochloride (Abmole，M1817，纯度>99%)() 是一种选择性的ROCK1(p160ROCK)抑制剂，Ki为140 nM，比对其他激酶包括PKC，cAMP依赖性蛋白激酶， MLCK和PAK的作用强200多倍。[SCH772984]4是一种新型特异性的ERK1/2抑制剂， IC50分别为4 nM和1 nM。

Fig. 4 Cholesterol-induced EGFR/Src/Erk signaling reactivation sustains ERRα re-expression.

为了确定哪些信号通路驱动信号通路在EGFR信号激活后ERRα的重表达，分别用抑制剂Rapamycin、AG-490、BAY 11-7082、SIS3、Y27632、SCH772984和WH-4-023对mTOR、STAT3、NF-κB、Smad、ROCK、Erk和Src进行检测。我们发现，Src和Erk的激酶抑制剂持续抑制了NSCLC细胞中ERRα蛋白和mRNA的表达(图4a，b)。进一步分析显示，EGFR、Src和Erk信号通路对吉非替尼或奥西替尼在耐药细胞中的抑制作用不敏感(图4c)。为了分析其调控层次，我们分别使用了EGFR、Src和Erk的抑制剂来处理NSCLC细胞。如图所示，EGFR信号被阻断后，p-Src和p-Erk被抑制。此外，WH-4-023下调了p-Erk的表达，而SCH772984对p-Src水平无影响(图4d)。这些数据表明，EGFR/Src/Erk级联反应的重新激活维持了ERRα在EGFR-TKIs耐药NSCLC细胞中的重新表达。

Fig. 5 SP1 transcribes ERRα directly and cholesterol/EGFR/Src/Erk axis regulates SP1 nuclear translocation.

EGFR/Src/Erk信号抑制剂SCH772984等抑制了SP1的核易位(图5d)。此外，通过MβCD治疗消除胆固醇，促进了吉非替尼或奥西替尼抑制SP1核易位。补充胆固醇会削弱这种效果(图5e)。此外，SP1过表达阻断了EGFR/Src/Erk抑制剂对ERRα表达的抑制作用(图5f)。

鸣谢：Zhenzhen Pan, et al. Mol Cancer. 2022 Mar 18;21(1):77.