AbMole科研-共价CDK7抑制剂THZ1通过抑制人肾细胞癌的自噬增强西罗莫司诱导的细胞毒性

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：共价 CDK7 抑制剂 THZ1 通过抑制人肾细胞癌的自噬增强西罗莫司诱导的细胞毒性。

肾细胞癌（RCC）是一种主要的肾脏癌症。 5 年生存率总体为 74%，而 4 期癌症仅为 8%。包括酪氨酸激酶抑制剂、mTOR 抑制剂和免疫检查点抑制剂在内的几种药物可用作转移性肾细胞癌的一线或二线治疗。然而，生存的好处是有限的。最近，THZ1 已被鉴定为干扰转录机制的细胞周期蛋白依赖性激酶 7 (CDK7) 抑制剂。尽管它在各种癌症模型中显然有效，但从未报道过 RCC 的数据。在这项研究中，我们在临床队列中证明了 CDK7 表达对肿瘤进展和患者生存的影响。我们发现 THZ1 在 RCC 细胞中诱导细胞凋亡和细胞周期停滞，从而降低细胞活力。此外，THZ1 在体外与 temsirolimus 有协同作用，可能是通过抑制自噬。此外，与单独使用 THZ1 或西罗莫司相比，联合治疗进一步抑制了体内肿瘤的生长。这些结果表明CDK7与RCC的进展和预后相关，是克服该癌症耐药性的潜在治疗靶点。

THZ1（Abmole，M5228，纯度98.33%）是一种是共价的CDK7抑制剂，在本研究中用于处理细胞，贯穿全程试验过程。

Fig. 2. THZ1 induces apoptosis in human renal cell carcinoma (RCC) cells

为了评估 THZ1 在 RCC 细胞中的细胞毒作用，进行了 MTT 测定以估计用各种浓度的THZ1 处理 24 小时和 48 小时后 786-O、Caki-2、ACHN 和 A 498 细胞的活力（图 2A 和 B）。 细胞活力以剂量依赖性方式降低。随着治疗持续时间的增加，活力进一步降低。 对于 786-O 细胞，24 小时后未达到半数最大抑制浓度 (IC50)，48 小时后约为 150 nM。786-O 细胞所需的剂量高于 Caki-2 细胞。这些结果表明THZ1对RCC细胞具有细胞毒作用。
为了评估THZ1 对 RCC 细胞凋亡的影响，用THZ1处理24小时后在786-O细胞中用膜联蛋白 V 染色进行流式细胞术（图 2C）。 随着 THZ1 的浓度增加到 200 nM，凋亡细胞的比例从 9.3% 增加到 39.5%。在 Caki-2 细胞中观察到类似的结果（图 2D）。

Fig. 3. THZ1 inhibits the proliferation of RCC cells by inducing G1 cell cycle arrest

为了评估THZ1对细胞周期调节的影响，进行了流式细胞术来估计细胞周期各个阶段的细胞比例。随着剂量的增加，THZ1处理导致786-O和Caki-2细胞中G0/G1期的细胞比例增加（图 3A 和 B）。此外，进行了免疫印迹以评估细胞周期相关蛋白的变化（图 3C 和 D）。 一致地，结果显示细胞周期蛋白 D1、细胞周期蛋白 D3、CDK4、CDK6、Cdc2、PCNA 和 cdc25c 的剂量依赖性减少，以及 p27 的剂量依赖性增加 为了评估细胞周期停滞的结果，进行了BrdU测定以估计细胞增殖活性（图 3E）。在 THZ1 处理后，两种细胞的增殖能力均下降。总的来说，这些结果表明 THZ1 通过调节细胞周期来减少 RCC 细胞的生长。

Fig. 4. The synergistic effect of THZ1 and temsirolimus on human RCC cells

由于 RCC 患者对 temsirolimus 的耐药性很常见，我们在将固定剂量的 THZ1 (200 nM) 和不同剂量的 temsirolimus (0-50 μM ) (图 4A 和 B)。在两种细胞系中，与单独用相同浓度的西罗莫司处理的组中的细胞活力相比，THZ1 显著降低了细胞活力。当与 THZ1 联合使用时，需要低得多的西罗莫司剂量才能达到相同的细胞毒性作用。此外，为了确认 THZ1 和 temsirolimus 的协同作用，我们在不同浓度下测试了这两种药物。结果表明THZ1与temsirolimus联合用药具有协同作用，THZ1在克服对temsirolimus耐药方面具有潜在作用。

鸣谢：Po-Ming Chow, et al. Cancer Lett. 2020 Feb 28;471:27-37.