AbMole科研-Dexmedetomidine预处理通过p38MAPK信号通路缓解H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激和凋亡

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是: Dexmedetomidine预处理通过p38MAPK信号通路缓解H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激和凋亡。

背景:缺血再灌注损伤(IRI)是围手术期器官损伤的主要原因，其发病率在人群中不断增加。由于缺乏有效的治疗，IRI与高死亡率有关。因此，我们需要找到一种有效的缓解IRI的方法。方法:分别用不同浓度的H2O2单独处理HUVEC和Dex联合处理HUVEC，探讨不同浓度的H2O2和Dex对HUVEC的剂量效应关系。为了探讨Dex与p38MAPK信号通路的关系，用p38MAPK信号通路抑制剂SB202190处理HUVEC。CCK-8法检测细胞活力。ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)。荧光探针DCFH-DA染色检测ROS水平。用碘化丙啶(PI)流式细胞仪测定细胞凋亡率。western blot检测p-p38MAPK、总p38MAPK、p-ERK1/2和caspase9蛋白的表达。

结果:1、H2O2可损伤HUVEC，导致LDH的释放。H2O2浓度越高，损伤越严重。2、Dex预处理可减弱H2O2诱导的HUVEC氧化应激损伤和凋亡。HUVEC细胞活性随Dex浓度升高而升高，LDH释放减少，细胞内ROS水平和凋亡率降低，pp38MAPK和caspase9蛋白表达减少，p-ERK1/2蛋白表达增加。3、Dex与p38MAPK信号通路抑制剂SB202190的作用相同。应用SB202190后，HUVECs活性显著升高，LDH、细胞内ROS和凋亡率显著降低。Western blot结果显示，p-p38MAPK和caspase9蛋白表达显著降低，p-ERK1/2蛋白表达显著升高。结论:1、Dex对H2O2诱导的HUVEC氧化应激损伤和凋亡具有浓度依赖性。2、Dex可能通过抑制p38MAPK信号通路来减弱H2O2诱导的HUVEC氧化应激损伤和凋亡。

SB202190 (Abmole，M2062，纯度>99%)是一种有效的p38 MAPK抑制剂，靶向作用于p38α/β，IC50为50 nM/100 nM，有时用于代替SB 203580用于调查其在体内对SAPK2a/p38的潜在作用。

Figure 4. Effects of inhibition of p38MAPK signaling pathway on oxidative stress injure induced by H2O2.

为了进一步验证Dex减轻氧化应激损伤的潜在机制，将HUVECs用Dex(10μM)或p38MAPK抑制剂SB202190(5μM)预处理2h或10min，然后暴露于550μM H2O2中12 h。结果显示，Dex和SB202190预处理均显著缓解细胞ROS水平(图4C, D)和LDH释放(图4B)。CCK-8实验也证实了Dex和SB202190对氧化应激损伤的细胞保护作用(图4A)。除此之外，我们还发现Dex和SB202190联合治疗的保护效果比单独治疗更强。这些结果表明，SB202190预处理减弱了HUVECs细胞ROS水平升高介导的氧化应激损伤。

Figure 5. Effects of inhibition of p38MAPK signaling pathway on apoptosis and the expression levels of p-p38MAPK and total p38 MAPK induced by H2O2.

我们还评估了SB202190对H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡和p38MAPK信号通路的影响。经SB202190处理后，p38MAPK磷酸化(图5E)和H2O2诱导的HUVECs凋亡(图5A, B)明显减少。凋亡相关蛋白caspase9表达也显著降低(图5C)，而p-ERK1/2表达显著升高(图5D)。与Dex组或SB202190组比较，Dex和SB202190联合组p-p38MAPK表达和凋亡率均显著降低。总之，SB202190抑制p38MAPK磷酸化，减弱H2O2诱导的凋亡，Dex的影响与SB202190相似。

鸣谢：Songkai Long, et al. Research Square. 2022 Feb 23.