AbMole科研-白斑综合征病毒直接激活mTORC1信号通路，通过聚合免疫球蛋白受体介导的对虾感染促进其复制

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是: 白斑综合征病毒直接激活mTORC1信号通路，通过聚合免疫球蛋白受体介导的对虾感染促进其复制。

已有研究表明雷帕霉素复合体1 (mTORC1)信号通路的机制靶点具有抗病毒功能或有利于病毒复制，但mTORC1增强病毒感染的具体机制尚不清楚。本研究发现，在日本囊对虾体内，敲低雷帕霉素机制靶点mTOR或雷帕霉素mTORC1注射抑制剂后，白斑综合征病毒(WSSV)的增殖能力下降，提示WSSV利用mTORC1在对虾体内复制。机制上，WSSV通过与其受体——聚合免疫球蛋白受体(pIgR)结合感染对虾，并诱导其胞内结构域与钙调素相互作用。钙调素通过与AKT的pleckstrin同源性(PH)结构域相互作用，促进蛋白激酶B (AKT)的激活。激活的AKT磷酸化mTOR，导致mTORC1信号通路激活，促进其下游效应子核糖体蛋白S6激酶(S6Ks)，用于病毒蛋白转译。此外，mTORC1还磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1 (4EBP1)，导致4EBP1与真核翻译起始因子4E (eIF4E)分离，用于虾体内病毒蛋白的翻译。我们的数据揭示了虾体内WSSV增殖的新途径，表明mTORC1可能是对虾养殖中WSSV控制的潜在临床靶点。

MK-2206 2HCl（Abmole，M1837，纯度>99%）是一种高度选择性的Akt1/2/3抑制剂，IC50分别为8 nM/12 nM/65 nM；对250种其他蛋白激酶没有抑制活性。

Fig 4. WSSV replication, 4EBP1 and S6K1 phosphorylation were inhibited by the AKT inhibitor, MK2206.

为了阐明mTORC1的上游分子AKT是否参与了WSSV感染中mTORC1信号的激活，注射AKT特异性抑制剂MK2206，并分析mTORC1的激活(以4EBP1磷酸化为指标)和WSSV的复制(以Vp28表达为指标)。首先，分析了MK2206对对虾的毒性，结果显示，1250 ng/g MK2206注射液对对虾死亡率无显著影响(图4A)。接下来，我们将不同剂量的MK2206注入WSSV感染后的虾体内，检测Vp28的表达水平。结果显示，与DMSO注射组相比，三种不同剂量的DMSO注射组在虾的血细胞和肠道中Vp28的表达均显著降低(图4B和4C)。WSSV感染后，MK2206注射组与DMSO注射组相比，VP28蛋白表达水平和AKT磷酸化水平均呈剂量依赖性下降(图4D和4D)。在注射MK2206的虾的肠道中，WSSV拷贝数也以浓度依赖性的方式显著减少(图4E)。接下来，我们检测注射MK2206 (1250 ng/g)后4EBP1和S6K1的磷酸化水平。结果显示，与对照组相比，血细胞中4EBP1和S6K1的磷酸化水平明显降低(图4F和4G)。最后，我们还对WSSV感染后的虾注射MK2206后的存活率进行了分析，结果显示，WSSV感染后的虾存活率明显提高(图4H)。以上结果表明，AKT在WSSV感染的虾中mTORC1信号的激活中是不可或缺的。

鸣谢：Pan-Pan Hong, et al. PLoS Pathog. 2022 Sep 6;18(9):e1010808.